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高效液相色譜分析土壤氨基糖|茁彩生物

發(fā)布時(shí)間: 2025-06-23  點(diǎn)擊次數(shù): 598次

氨基糖在土壤有機(jī)碳和有機(jī)氮含量中的占比分別為 2% ~ 5%和 5% ~ 12%。由于植物不含氨基糖,土壤動(dòng)物只向土壤貢獻(xiàn)少量的氨基糖,因此土壤中的大部分氨基糖被認(rèn)為主要來自微生物。氨基糖作為微生物死亡殘?bào)w的生物標(biāo)志物被廣泛測(cè)定。目前可被定量分析測(cè)定的土壤氨基糖主要有4種:胞壁酸 (MurN)、甘露糖 (ManN)、氨基半乳糖 (GalN) 和氨基葡萄糖 (GluN)。其中,胞壁酸和氨基葡萄糖是微生物細(xì)胞壁殘留物,胞壁酸只存在于細(xì)菌細(xì)胞壁中,氨基葡萄糖來自于細(xì)菌和真菌細(xì)胞壁,而甘露糖和氨基半乳糖的來源尚不清楚。



氨基糖具有異源性,可作為微生物殘留物標(biāo)識(shí)物用于評(píng)估土壤中不同微生物死亡殘?bào)w有機(jī)碳的含量。 Appuhn 和Joergensen確定了將真菌氨基葡萄糖轉(zhuǎn)化為真菌殘?bào)w碳的平均轉(zhuǎn)化系數(shù)為 9,將細(xì)菌胞壁酸轉(zhuǎn)化為細(xì)菌殘?bào)w碳的平均轉(zhuǎn)化系數(shù)為 45。由于土壤微生物殘?bào)w碳的周轉(zhuǎn)時(shí)間比微生物活體碳更長,對(duì)土壤中穩(wěn)定性碳庫的形成具有重要貢獻(xiàn)。因此,精確地測(cè)定土壤氨基糖含量對(duì)于評(píng)估微生物對(duì)土壤有機(jī)碳的貢獻(xiàn)具有重要意義。

國內(nèi)外針對(duì)土壤氨基糖含量的分析測(cè)定方法開展了大量的研究。早期分析氨基糖的方法有電化學(xué)法、光度法和電泳法等。這些方法由于受樣品雜質(zhì)影響大,對(duì)復(fù)雜環(huán)境樣品分析受限。目前,常用的分析方法有氣相色譜法、液相色譜法、

紅外光譜法和氣質(zhì)聯(lián)用法。這些方法所采用的前處理方法和檢測(cè)技術(shù)各不相同。氣相色譜法前處理過程繁瑣,且需要手動(dòng)進(jìn)行衍生化處理。紅外光譜法雖具有結(jié)構(gòu)定性方面的優(yōu)勢(shì),但靈敏度較低。氣質(zhì)聯(lián)用法具有定性、可靠性和靈敏度高的特點(diǎn),但是由于成本太高,因而沒有被廣泛應(yīng)用。高效液相色譜法采用自動(dòng)進(jìn)樣器用戶模式進(jìn)行鄰苯二甲醛 (OPA) 在線衍生的方法,操作簡(jiǎn)單方便。Indorf 等分析 了激發(fā)波長、OPA 反應(yīng)時(shí)間、四氫呋喃濃度和流動(dòng)相 pH 對(duì)氨基糖分離的影響,對(duì)高效液相色譜法進(jìn)行化,使高效液相色譜法具有檢出限低、靈敏度和準(zhǔn) 確度高等特點(diǎn),從而使該方法得以廣泛應(yīng)用。

關(guān)于土壤氨基糖的分析測(cè)定多從檢出限、定量限、標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性、樣品的重復(fù)性、加標(biāo)回收率這幾個(gè)方面考慮方法的質(zhì)量控制。例如,Zhang 和 Amelung報(bào)道了氣相色譜法分析氨基糖的儀器定量限、標(biāo)準(zhǔn)樣品線性、樣品含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和土壤基質(zhì)加標(biāo)回收率。Dick 等和 Zhang 等報(bào)道了紅外光譜法分析氨基糖的標(biāo)準(zhǔn)樣品線性。近年來,國內(nèi)根據(jù) Indorf 等的方法,建立了高效液相色譜分析土壤氨基糖的方法。一種分析方法的好壞不僅要考慮儀器的靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度,同時(shí)也要考慮包括前處理在內(nèi)的方法的靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度。

Indorf 等通過儀器檢出限和定量限檢驗(yàn)了高效液相色譜法分析氨基糖樣品過程中儀器的靈敏度,通過標(biāo)準(zhǔn)樣品線性檢驗(yàn)了儀器的準(zhǔn)確度,通過空白加標(biāo)回收率檢驗(yàn)了儀器和方法的準(zhǔn)確度,但是未見包括前處理在內(nèi)的整個(gè)氨基糖分析流程中儀器和方法精密度的質(zhì)量控制。

研究利用 OPA 柱前在線衍生–高效液相色譜法結(jié)合熒光檢測(cè)器分析紅壤剖面中具有不同氨基糖含量的土壤樣品,利用信噪比、檢出限、定量限反映儀器和方法的靈敏度,利用標(biāo)準(zhǔn)樣品平行樣、土壤樣品平行樣和土壤樣品重復(fù)樣的重復(fù)性反映儀器和方法的精密度,利用標(biāo)準(zhǔn)樣品的線性和加標(biāo)回收率反映儀器和方法的準(zhǔn)確度,以為 OPA 柱前在線衍生–高相液相色譜法測(cè)定土壤氨基糖含量的質(zhì)量控制提供依據(jù)。


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